Citometria a flusso

La risorsa condivisa della citometria a flusso Fornisce accesso centralizzato a tecnologie avanzate di citometria e supporto tecnico specialistico per i membri dell'UNMCCC, i laboratori dell'UNM e la comunità scientifica in generale. La risorsa offre analisi citofluorimetriche all'avanguardia e ordinamento cellulare ad alta velocità attraverso un repertorio di modelli di servizio scalabili, tra cui acquisizione di servizi completi, flussi di lavoro assistiti e utilizzo indipendente, tutti personalizzati per soddisfare le diverse esigenze degli utenti e i diversi livelli di competenza.

 I servizi supportano un'ampia gamma di applicazioni, tra cui l'immunofenotipizzazione classica, l'analisi del ciclo cellulare e dell'apoptosi, gli studi sul microambiente tumorale e sull'infiltrazione leucocitaria, nonché il sorting di singole cellule per la generazione di linee monoclonali, la costruzione di librerie CRISPR o l'integrazione in flussi di lavoro di sorting-sequenziamento (ad esempio, 10x Genomics scRNA-seq). Il sorting in massa è disponibile anche per la ricoltura, il trapianto o le analisi omiche a valle.

Il personale esperto fornisce consulenza sulla progettazione del pannello, sullo sviluppo del protocollo, sulla configurazione degli strumenti e sull'interpretazione dei dati per garantire risultati riproducibili e di alta qualità.

W. Curt Hines, Dottorato

Direttore della facoltà, risorsa condivisa per la citometria a flusso
Professore Associato, Dipartimento di Biochimica e Biologia Molecolare

Sala Fitz Sala 255
915 Camino De Salud NE
Albuquerque, NM 87131
Telefono: 505-681-0014

Invia un'e-mail al dottor Hines

Josh Monts, MS

Direttore tecnico, risorsa condivisa per la citometria a flusso

2325 Cammino di Salute, CRF 217
UNM Centro completo per il cancro
Centro di scienze della salute dell'Università del New Mexico
Albuquerque, NM 87131
Telefono: 505-925-0064

Invia un'e-mail a Josh Monts

Strumentazione per citometria: analizzatori

Tariffa UNM senza assistenza: $ 94/ora

Tariffa non UNM: $ 141.94/ora

Tariffa UNM senza assistenza: $ 73/ora

Tariffa non UNM: $ 110.23/ora

Tariffa UNM senza assistenza: $ 113/ora

Tariffa non UNM: $ 170.63/ora

Tariffa UNM senza assistenza: $ 79/ora

Tariffa non UNM: $ 119.29/ora

Strumentazione citometrica: selezionatori di cellule

Tariffa assistita dall'UNM 
Tariffa per lo strumento: $ 156/ora + Tariffa tecnica: $ 128/ora

Tassa non UNM
Tariffa per lo strumento: $ 235.56/ora + Tariffa tecnica: $ 181.20/ora

 

Tariffa non assistita UNM: $ 73 /hr

Tariffa non UNM: $ 110.23 /hr

 

Applicazioni, capacità e riconoscimenti

Risorse condivise per la citometria a flusso UNM
MSC 08-4640 UNM CRF 217A
915 Cammino De Salud
Albuquerque, NM 87131
Telefono 505 925 0064

La citometria a flusso può essere utilizzata per le seguenti applicazioni e procedure:

  • Immunofenotipizzazione
  • Analisi del ciclo cellulare e della ploidia tumorale
  • Saggi di proliferazione cellulare
  • Attività enzimatica
  • Caratterizzazione e quantificazione delle citochine
  • Caratterizzazione dell'apoptosi e della necrosi e vitalità cellulare
  • Metabolismo cellulare
  • Flusso di calcio intracellulare
  • Reazioni redox
  • Contenuto mitocondriale e potenziale di membrana
  • Efficienza di trasfezione

Sono disponibili licenze FlowJo, informarsi sui costi.

Gli utenti con licenze di portale attive devono fare riferimento a questo guida.

La risorsa condivisa per citometria a flusso ha le seguenti capacità di ordinamento delle cellule:

  • Ordinamento cellulare in blocco: massimo 4 popolazioni diverse contemporaneamente
  • Ordinamento di cellule singole in piastre a pozzetti multipli
  • Richiede un'operazione assistita

Le applicazioni di ordinamento includono la generazione di linee cellulari monoclonali e librerie CRISPR, compreso l'arricchimento post-transfezione e la purificazione di un campione eterogeneo per ricoltivare, trapiantare o sequenziare sottoinsiemi di cellule o popolazioni purificate.

La politica della Risorsa prevede che tutti i nuovi utenti seguano sessioni di formazione specifiche per la macchina. Queste sessioni di formazione consistono in genere in due sessioni diverse con il Flow Core Manager e un singolo utente. Ogni sessione dovrebbe durare da 1 a 2 ore.

Le sessioni di formazione sono programmato tramite iLabsPer domande riguardanti iLabs o per la configurazione dell'account/PR per l'uso nella risorsa condivisa, si prega di e-mail Palakshi Reddy Bandapalli o chiamare 505-272-4539.

L'utente è responsabile di fornire quanto segue per la propria sessione di formazione.

Cellule preparate @ 1x106/ml in provette FACS/Eppendorfh – La formazione Cytek Aurora richiede provette FACS

  • Le tue cellule dovrebbero essere filtrate attraverso un filtro da 50 μm prima di funzionare sui citometri 
  • Il volume delle cellule deve essere compreso tra 500 e 1000 μL

Le seguenti celle sono necessarie per l'allenamento

  • Controllo non macchiato
  • Controlli di compensazione: controlli di colore singolo per ciascun fluorocromo. Le sfere di compensazione sono preferite per i marcatori deboli/rari. Le cellule sono preferite per i marcatori altamente espressi.
  • Campioni completamente colorati

Costi di formazione strumentale:

  • Tariffa UNM senza assistenza: $ 192/ora
  • Tariffa non UNM: $ 285.39/ora

Per riconoscere l'uso di questa risorsa condivisa, includi quanto segue nelle tue pubblicazioni:

Questa ricerca è stata parzialmente supportata da UNM Comprehensive Cancer Center Support Grant NCI P30CA118100 e dalla risorsa condivisa Flow Cytometry.

Altre attrezzature principali

  • BioTek Neo2 nella risorsa condivisa Citometria a flussoScopri di più BioTek Neo2
  • Lettore di lastre ibrido multimodale
  • Filtro indipendente e ottica basata su monocromatore
  • Misure di assorbimento, fluorescenza, luminescenza, polarizzazione di fluorescenza

Tariffa UNM senza assistenza: $ 89/ora

Tariffa non UNM: $ 134.39/ora

  • Magpix nella risorsa condivisa di citometria a flussoScopri di più MAGPIX
  • Pannello multi-analita basato su sfere magnetiche per la quantificazione di biomarcatori

Tariffa UNM senza assistenza: $ 97/ora

Tariffa non UNM: $ 146.47/ora

Politiche e procedure

È tua responsabilità leggere e comprendere queste informazioni.

La risorsa condivisa UNM Flow Cytometry fornisce citometria a flusso analitica e servizi di smistamento cellulare situati in CRF 217. Per consentire un funzionamento regolare e un accesso equo all'attrezzatura per tutti gli investigatori e per mantenere l'attrezzatura in condizioni di lavoro adeguate, devono essere seguite politiche e procedure operative.

Di seguito sono descritte le principali politiche operative.

Gli appuntamenti per tutto il tempo di utilizzo dello strumento devono essere programmati in iLabs.

L'assistenza dell'operatore è necessaria per lo smistamento delle cellule.

Gli appuntamenti per lo smistamento delle celle richiedono un preavviso minimo di 24 ore. La fatturazione dell'ordinamento delle celle inizia all'inizio dell'appuntamento; la fatturazione termina quando termina l'ordinamento. Se il tuo ordinamento termina in anticipo, quel tempo non ti verrà addebitato. 

Gli utenti approvati e formati possono fissare appuntamenti per l'auto-operazione lo stesso giorno. 

Gli appuntamenti serali e nel fine settimana sono autorizzati solo per un uso addestrato e autogestito.

Sebbene le calibrazioni e altre procedure di manutenzione siano responsabilità del Flow Core, è importante che gli utenti eseguano correttamente le procedure di avvio, arresto e pulizia come descritto nelle sessioni di formazione.

La corretta decontaminazione e pulizia del tubo della fluidica e della cella di flusso deve seguire ogni utilizzo del citometro.

Le procedure di lavaggio e pulizia successive all'acquisizione sono considerate normali tempi di esecuzione e verranno fatturate come parte del tempo totale dell'appuntamento.

Tutti gli utenti devono essere aggiornati con la formazione sulla sicurezza del laboratorio BSL1 e BSL2 (inclusa nella formazione sulla sicurezza della ricerca che è obbligatoria per tutti i ricercatori del campus).

BSL3 e campioni radioattivi non sono ammessi nella nostra struttura in nessun caso.

I nuovi utenti della citometria a flusso devono essere formati dal personale principale prima di accedere alla strumentazione.

Ci si aspetta che gli operatori autonomi siano in grado di svolgere le normali operazioni senza l'assistenza dell'operatore della struttura, inclusi avvio e arresto, analisi, sterilizzazione e manutenzione (intasamento degli ugelli, ecc.).

Nota bene: se una corsa autonoma e non assistita richiede più di 20 minuti di assistenza da parte del personale, verrà aggiunta una tariffa "tempo tecnico" per convertire la prenotazione in una sessione parzialmente o completamente assistita: utilizzo non assistito + tempo tecnico/ora.

Se la tua corsa richiede più tempo del previsto e si imbatterà nel tempo di un altro utente, quest'ultimo ha il diritto di urtarti nel momento in cui inizierà la sua corsa.

Ultimo utente della giornata – Spegnere lo strumento analitico è responsabilità dell'ultimo utente della giornata. Se l'ultima persona della giornata non può raggiungere l'orario previsto, deve informare la persona prima di spegnere la macchina. Se non c'è nessun'altra persona, l'ultima persona prenotata deve venire al nucleo del flusso e spegnere la macchina.

Le prenotazioni possono essere effettuate il giorno dell'utilizzo e devono essere effettuate in iLabs. La compilazione del tempo esatto di utilizzo nei quaderni da parte di ogni strumento assicura che gli addebiti saranno per il tempo utilizzato sulla macchina

La formazione per singolo utente è disponibile solo su appuntamento e verrà eseguita utilizzando campioni forniti dallo sperimentatore.

Il personale del centro di flusso determinerà quando l'investigatore è in grado di operare autonomamente.

Gli utenti della struttura sono responsabili dell'archiviazione di tutti i dati.

La struttura delle risorse condivise non ha la capacità di fungere da repository di dati

Gli utenti devono segnalare immediatamente i problemi alla struttura a Josh Monts at jmonts@salud.unm.edu.

Avviseremo gli utenti quando uno strumento è inattivo. Se lo strumento su cui hai effettuato la prenotazione non funziona, faremo del nostro meglio per aiutarti a raccogliere i tuoi dati su uno strumento diverso e rinunceremo al supplemento di assistenza. 

Il direttore Dr. Curt Hines è l'arbitro finale per i problemi che sorgono nella struttura.