Microscopia a fluorescenza e imaging cellulare
La microscopia è al centro della comprensione dell'architettura dei tessuti, della struttura e della dinamica delle cellule, nonché della funzione molecolare. La microscopia a fluorescenza viene utilizzata abitualmente per determinare informazioni spaziali e topologiche su cellule e tessuti. Sofisticati strumenti microscopici a scansione laser, fotocamere digitali ultra sensibili e sonde a fluorescenza specializzate consentono di visualizzare gli eventi cellulari in tempo reale fino al livello molecolare.
La risorsa condivisa per la microscopia a fluorescenza e l'imaging cellulare promuove l'eccellenza nella ricerca sul cancro rendendo disponibili strumenti e software all'avanguardia per l'imaging a fluorescenza quantitativa, multiscala e multimodale.
Avanzare l'eccellenza nella ricerca sul cancro
La risorsa condivisa per la microscopia a fluorescenza e l'imaging cellulare aiuta i ricercatori medici e di base a visualizzare campioni e pubblicare articoli di alto profilo che:
- Chiarire i meccanismi cellulari e molecolari del cancro, delle malattie immunologiche, infettive, metaboliche, neurologiche e vascolari
- Valutare l'efficacia terapeutica nelle cellule e nei campioni dei pazienti
- Testare nuove nanotecnologie in saggi cellulari
- Misurare quantitativamente i cambiamenti nella morfologia e nella patologia dei tessuti
La risorsa condivisa per la microscopia a fluorescenza e l'imaging cellulare fornisce ai ricercatori dell'UNM l'accesso a strumentazione all'avanguardia per tecniche multiple di microscopia a fluorescenza e a luce trasmessa:
- I microscopi a scansione laser a singolo e multifotone e i sistemi di imaging iperspettrale consentono la visualizzazione e la quantificazione simultanee di colorazioni istochimiche ed etichette fluorescenti
- Applicazioni TIRF (Total Internal Reflection Fluorescenza), Single Particle Tracking (SPT) e Single Molecule Localization Microscopy (SMLM) per quantificare gli eventi dinamici delle cellule vive e ottenere una risoluzione al di sotto del limite di diffrazione della luce
- L'imaging raziometrico consente la quantificazione dei cambiamenti in tempo reale nelle concentrazioni di calcio e altri ioni in risposta alla segnalazione cellulare
La risorsa condivisa per la microscopia a fluorescenza e l'imaging cellulare dispone di personale di risorse che offre investigatori:
- Consulenza di esperti sulla progettazione dell'esperimento e sulla preparazione del campione
- Formazione
- Imaging a pagamento
- Assistenza continua
Diane Lidke, PhD; Direttore di Facoltà
Dipartimento di Patologia
2325 Camino de Salud, CRF203A
UNM Centro completo per il cancro
Albuquerque, New Mexico 87131
Telefono: (505) 272-8375
Invia un'e-mail alla dottoressa Diane Lidke
Keith Lidke, PhD; Consigliere Speciale
210 Yale Boulevard NE, 2218
Edificio scientifico interdisciplinare di fisica e astronomia
Albuquerque, New Mexico 87106
Telefono: (505) 277-2616
Per riconoscere l'uso di questa risorsa condivisa, includi quanto segue nelle tue pubblicazioni:
Questa ricerca è stata parzialmente supportata da UNM Comprehensive Cancer Center Support Grant NCI P30CA118100 e ha fatto uso della risorsa condivisa Microscopia a fluorescenza e Imaging cellulare.
Dopo la pubblicazione, inviaci una delle tue ristampe o immagini di copertina per i nostri archivi.
Strumentazione
Posizione: CRF212
Dettagli del microscopio
- Microscopio invertito Olympus IX83 personalizzato con tavolino XY motorizzato ultraveloce Martzauzer con inserto Z piezoelettrico.
- Cool LED pE-300Ultra LED LED multispettrale (campo ampio) e Lumencor PEKA LED (campo chiaro)
- Olio siliconico 10X/0.4NA, 30X/1.05NA, olio siliconico 40X/1.25NA, olio siliconico 60X/1.3NA Olio siliconico 100x/1.35NA
- DIC compatibile con ottiche da 30X a 100x.
- Olympus Real Time Controller per una sincronizzazione temporale precisa della fotocamera e dell'eccitazione
- Testa del disco rotante con doppia fotocamera Yokogawa CSU-W1 e caricatore magnetico SD-SR 3X
- Telecamere sCMOS Hamamatsu ORCA-Fusion Gen III retro-assottigliate
- 4 linee laser OBIS individuali: 405 nm (50 mW); 488 nm (100 mW); 561 nm (100 mW) e 640 nm (100 mW)
- Imaging a 4 colori (2 canali simultanei) Filtri di emissione FWHM come segue: Blu (447/60); VERDE (525/50); ROSSO 607/36 e ROSSO Lontano (685/40)
- Messa a fuoco automatica IR ZDC2 non distruttiva delle foto per funzionalità di messa a fuoco automatica continua o a scatto estremamente veloce
- Tokai Hit WSKMX incubatore sul palco per l'imaging di cellule vive
- Software di acquisizione delle immagini Olympus cellSens Dimension
- Post-elaborazione abilitata per GPU fornita da Huygens Essentials per il ripristino delle immagini (deconvoluzione)
Possibili applicazioni
- Imaging multidimensionale e ad alta velocità di cellule vive in cui la fototossicità rappresenta un problema
- Acquisizione 3D, time lapse e affiancamento
- Campioni volumetrici come sferoidi/organoidi, embrioni di pesce zebra ed embrioni di drosophila
Posizione: CRF219
Dettagli del sistema
- Microscopio invertito Olympus IX83 personalizzato con tavolino di scansione piezoelettrico Asylum 3D XYZ
- LED multispettrale Excelitas Turbo (campo largo) e lampada alogena (campo chiaro)
- Obiettivo per immersione in olio 10X/0.3NA, 20X/0.7NA e 100X/1.4NA
- Telecamera CCD monocromatica Olympus XM10
- Asylum MFP Origin Testa AFM con escursione estesa per preparazioni biologiche
- Software Asylum Research per controlli AFM
- Software Olympus cellSens per controlli di microscopia ottica
- Bioriscaldatore per lavorare con cellule/tessuti vivi
- Sonde di addestramento fornite fino a esaurimento scorte!
- Piastre compatibili con AFM: WillCo cover bottom chambers (Ted Pella cat # 14025-20) e BD Falcon (#351006) piastre di coltura in polistirene
- Le superfici atomicamente piatte (mica o HOPG) per la scansione ad alta risoluzione sono disponibili su Ted Pella.com - richiedere assistenza
Possibili applicazioni
- Modalità contatto alternato (CA)., noto anche come Tapping Mode, per l'imaging su scala nanometrica in preparazioni a secco o a umido
- Modalità di contatto per misurazioni della forza meccanica (modulo elastico, adesione, indentazione e mappatura della forza) in preparazioni asciutte o umide
Posizione: CRF216
Dettagli del microscopio
- Microscopio invertito Leica DMi8 con tavolino motorizzato XY
- Lampada a fluorescenza ad alogenuri metallici e lampada a trasmissione alogena
- Obiettivi DIC 10X, 20X olio, 25X acqua, 63X acqua e 63X olio DIC
- Eccitazione laser per PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, rodamina e fluorofori simili a Cy5
- Laser a luce bianca sintonizzabile e pulsata: 470 - 670 nm
- Due laser aggiuntivi: diodo laser da 405 nm e un multi-argon (linee 458, 477, 488, 514 nm)
- Sei rivelatori: 2 rivelatori spettrali ibridi* (HyD); 2 HyD spettrali SMD**, 1 PMT spettrale standard e 1 PMT trasmesso (esterno)
- Palco Z Galvo
- Scanner di risonanza
- Modulo di microscopia a fluorescenza a vita (FLIM) Pico Harp 300
- Software di acquisizione LASX
- SymphoTime64 (PicoQuant) Software FLIM
- Software di deconvoluzione Huygens
- Tokai Hit Stage Top Incubator per l'imaging di cellule vive
* Gli HyD sono rilevatori specializzati che utilizzano fotocatodi GAsP e fotodiodi da valanga
**Rivelatori di singole molecole (SMD)
Possibili applicazioni
- Provini fissi montati su vetrino standard con coprioggetto #1.5
- Campioni di cellule vive (LabTekII #1.5 multi-pozzetto o 35 mm (#1.5) fondo di copertura)
- FLIM FRET (fisso o live-cell)
- FRET Accettore Sbiancante (fisso)
- Emissione sensibilizzata FRET (live-cell)
- FRAP (cellule vive)
- Acquisizione 3D (Z-Stack) e imaging Time Lapse
- Unmixing multispettrale
- Scansioni di piastrelle di grandi dimensioni e multidimensionali
- Super risoluzione tramite elaborazione del ripristino dell'immagine (~130nm)
Posizione: CRF226
Dettagli del microscopio
- Microscopio invertito Zeiss AxioObserver con tavolino motorizzato XY
- Lampada fluorescente ad alogenuri metallici e lampada a trasmissione alogena
- Obiettivi 10x, 20x, 40x ad olio, 63x ad olio e 63x ad immersione in acqua
- DIC disponibile con obiettivi 10x, 20x, 40x e 63x
- Eccitazione laser per PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, rodamina e fluorofori simili a Cy5
- Quattro laser a stato solido: 405 nm, 488 nm, 561 nm, 640 nm
- Rilevamento di canale e spettrale – Rivelatori PMT GaAsP
- Rilevamento simultaneo in 3 canali disponibile in modalità Canale
- Rivelatore array Airyscan per un aumento di 1.7 volte nella risoluzione XY
- Rilevatore di luce trasmessa
- Sistema di incubazione di cellule vive: controllo di temperatura, umidità e CO2
- Software di acquisizione immagini Zen Blue
Possibili applicazioni
- Provini fissi montati su vetrino standard con coprioggetto #1.5
- Campioni di cellule vive (LabTekII #1.5 multi-pozzetto o 35 mm (#1.5) fondo di copertura)
- FRET Accettore Sbiancante (fisso)
- Emissione sensibilizzata FRET (live-cell)
- FRAP (cellule vive)
- Acquisizione 3D (Z-Stack) e imaging Time Lapse
- Unmixing multispettrale
- Scansioni di piastrelle di grandi dimensioni e multidimensionali
- Super risoluzione tramite elaborazione del ripristino dell'immagine (~130nm)
Posizione: CRF226
Dettagli del microscopio
- Microscopio invertito Olympus IX83 personalizzato con tavolino XY motorizzato ASI con inserto piezo Z.
- LED multispettrale Excelitas Turbo (campo ampio) e LED bianco Lumencor (campo chiaro)
- Obiettivi 20x/0.8NA oil, 60x/1.5NA oil TIRF, 60x/1.2NA water e 100x/1.4NA oil
- Capacità DIC per ottiche 60x e 100x.
- Olympus Real Time Controller per una sincronizzazione temporale precisa della fotocamera e dell'eccitazione
- Illuminatore MITICO TIRF a 4 linee laser per profondità di penetrazione indipendenti
- 4 linee laser individuali per TIRF: 405 nm (100 mW); 488 nm (100 mW); 561 nm (100 mW) e 640 nm (140 mW)
- Possibilità di imaging di lastre con microscopia a ricostruzione ottica stocastica diretta (dSTORM), microscopia di localizzazione fotoattivata (PALM) e HILO (Highly Inclined Laminar Optical)
- Telecamera sCMOS Hamamatsu Fusion e splitter di immagini Geminini W-View per acquisizioni simultanee di 2 celle live a colori.
- Messa a fuoco automatica IR ZDC2 non fotodistruttiva per uno scatto estremamente veloce o capacità di messa a fuoco automatica continua
- Riscaldatore obiettivo BiopTechs per applicazioni di cellule vive a breve termine
- Software di acquisizione delle immagini Olympus cellSens Dimension
Possibili applicazioni
- Provini fissi con coprioggetto #1.5H
- Campioni di cellule vive (LabTekII #1.5H multi-pozzetto o fondo di copertura da 35 mm (#1.5H))
- Acquisizione 3D (Z-Stack) e imaging Time Lapse
- Applicazioni specifiche includono il rilevamento di singole molecole TIRF a cellule vive, HILO, 2D dSTORM o PALM
- Post-elaborazione abilitata per GPU fornita da Huygens Localizer
Posizione della fotocamera: CRF218
Dettagli del microscopio
- Microscopio invertito Olympus IX-71
- Lampada a fluorescenza al mercurio e lampada a trasmissione alogena
- Monocromatore – Gamma di eccitazione 350nm-670nm
- Laser: 405 nm, 488 nm, 520 nm e 642 nm
- Obiettivi TIRF 20x, 60x H2O, 100x Oil, 150x Oil
- Filtri a fluorescenza per Quantum Dots, DAPI, FITC e fluorofori simili a Rhod, Fura-2, Indo-1
- Software di acquisizione immagini Andor IQ
- Riscaldatore oggettivo e dispositivi patologici Sistema di incubazione di cellule vive con CO2, calore, umidità
- Tavolino motorizzato XYZ
- Fotocamera Andor iXon EM-CCD
- Splitter ottico (doppio) Image splitter
Possibili applicazioni
- Provino fisso montato su vetrini
- Imaging cellulare vivo con obiettivo più caldo warm
- Tracciamento di singole particelle
- Fluorescenza a riflessione interna totale (TIRF)
- Imaging rapporto-metrico (doppia eccitazione/singola emissione o singola eccitazione doppia emissione)
- Cellule vive in coltura
- Fluorescenza a largo campo: molti fluorofori possibili con il monocromatore
- Z-stack e serie temporali
Posizione della fotocamera: CRF212
Dettagli del microscopio
- Microscopio a fluorescenza invertita Zeiss AxioObserver
- Fotocamera Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS monocromatica (100fps a piena risoluzione 2048x2048)
- Lampada fluorescente ad alogenuri metallici e lampada a trasmissione alogena
- Obiettivi 10x, 20x, 63xDIC Oil e 100x Oil
- Contrasto di fase per obiettivi 10x e 20x
- I set di filtri per fluorescenza includono: DAPI, FITC, Rhodamine/TRITC/Cy3, Texas Red e Cy5
- DIC disponibile con obiettivi 63x
- Riscaldatore dell'obiettivo (obiettivo ad acqua 63x) o Portaobiettivi motorizzato per l'impilamento a Z
- Tavolino XY motorizzato per l'acquisizione di immagini multiposizione (imaging time lapse fisso o live-cell)
- Software di acquisizione immagini SlideBook6
Possibili applicazioni
- Provino fisso montato su vetrini
- Cellule vive in un coprioggetto/riscaldamento con riscaldatore obiettivo
- DIC (non confocale) con obiettivi 63x, fusi con fluorescenza o da soli
- Z-stack, montaggio e imaging di serie temporali
Situato in CRF224 e CRF226
Software
- Imaging scientifico del volume di deconvoluzione di Huygens (1)
- Quaderno diapositive (1)
- Stereoinvestigatore (1)
- Neurolucido (1)
- LASX (confocale Leica) (1)
- IQTL (analisi scanner tifone) (1)
- Zen (2)
- LSM510 (2)
- Software di imaging spettrale Nuance (2)
Opzioni di analisi
- Co-localizzazione
- deconvoluzione
- Unmixing spettrale
- Analisi dell'intensità
- Analisi morfologica
- Rendering 3D
- Conteggio degli oggetti
- Tracciamento delle particelle
- Preparazione per la pubblicazione
Situato in CRF214
Typhoon FLA 7000 è uno scanner laser veloce e versatile per applicazioni di imaging biomolecolare, tra cui:
- misurazioni sensibili e quantitative di etichette radioisotopiche
- Western blot chemifluorescenti
- singola fluorescenza (eccitazione visibile)
- documentazione di colorazioni colorimetriche (p. es., blu di Coomassie e gel color argento)
Situato in CRF214
Li-Cor Odessey Fc è uno scanner nel vicino infrarosso (680 nm e 740 nm) per applicazioni di imaging biomolecolare, tra cui:
- misurazioni sensibili e quantitative di Western blot chemiluminescenti
- documentazione di colorazioni colorimetriche (p. es., blu di Coomassie e gel color argento)
I servizi di microscopia includono
- Consulenza di esperti sulla progettazione dell'esperimento e sulla preparazione del campione
- Formazione agli utenti
- Imaging assistito dall'operatore e acquisizione dei dati preliminari per le domande di finanziamento
- Open house annuale per informare gli utenti degli aggiornamenti su nuove strumentazioni, tecnologie e applicazioni
- Corso di microscopia per dottorandi e assegnisti su ottica e funzionalità degli strumenti
- Workshop annuali che offrono ai nuovi utenti una formazione pratica nella preparazione dei campioni
Acquisizione a riposo FasLGFP_20201113_165
Microscopia a fluorescenza a riflessione interna totale (TIRF) dell'espressione dell'attività FasL-GFP basale nelle cellule RBL
Servizi e tariffe di microscopia
Zeiss AxioObserver – Fotocamera monocromatica Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS: $ 7/ora
Disco rotante Yokogawa: $ 30/ora
Leica TCS-SP8/FLIM: $50/ora
Zeiss LSM800: $45/ora
Microscopio Olympus IX71 a rilevamento di particelle singole/rapporto metrico (Rm. 218): $ 25/ora
Microscopio Olympus IX83 TIRF/dSTORM (Rm. 226): $ 30/ora
Formazione su tutti gli strumenti, imaging con operatore e formazione sull'analisi: $ 125/ora
- Confocale (4 ore)
- Advanced Wide Field (2-3 ore)
- Microscopia a forza atomica (4-8 ore)
- Campo ampio di base (0.5-1 ora)
- Imaging con formazione per operatori e analisi (a seconda del progetto)
Workstation offline, senza assistenza: $ 5/ora
Finanziamento della struttura
La risorsa condivisa per la microscopia a fluorescenza dell'Università del New Mexico e del Cancer Center riconosce i seguenti finanziamenti per l'acquisto di strumentazione o il supporto della struttura sin dalla sua apertura nel 1999.
Finanziamento attuale
NCI 2P30 CA118100 (PI Willman, C.) "UNM Cancer Center Support Grant" 9/25/05-8/31/20
NIGMS 5P50 GM085273 (PI Wilson, BS) "Centro per la modellizzazione spaziotemporale delle reti di segnalazione cellulare (STMC)" 08/01/08-07/31/19
STMC P50GM085273: supporto finanziario per Leica TCS-SP8 e Olympus iX71
Finanziamenti passati alla strumentazione
NCRR 1 S10 RR14668 (PI Wandinger-Ness, A.) "Un microscopio confocale Zeiss LSM510 per la ricerca nelle scienze della salute" 04/01/00 03/31
NSF MCB9982161 (PI Wandinger-Ness, A.) "Rab7 and Accessory Protein Function in Late Endocytosis" (Acquisto della fotocamera digitale Hamamatsu per l'imaging di cellule vive) 04/01/00-03/31/06
NCRR S10 RR016918 (PI Wandinger-Ness, A.) "Zeiss Axiovert 200 per progetto di imaging cellulare dal vivo" 08/01/02/04/01
NCRR S10 RR19287 (PI Wandinger-Ness, A.) “META Detector e Laser 405 nm” 04/01/04/03/31
NCRR 1S10RR025540 (PI Wandinger-Ness, A., co-I Lee, R.) "A Confocal Stereology Microscope for UNM's Fluorescence Microscopy Core" ARRA 05/01/09-03/31/10
NSF DGE-0549500 (PI Osinski, M. co-I, Oliver Co-PI) “Nanotechnology for Cell Biology and Neuroscience” (Acquisto di accessori per Olympus IX71) 6/15/06-5/31/11
Matthews Family Fund (PI Lee, R.) "Sistema di imaging spettrale Nuance, Cri" 01/01/09-12/31/-09
NIDDK 3R301 DK050141 (PI Wandinger-Ness, A.) "Meccanismi patologici della malattia del rene policistico" Acquisto di Zeiss Axio Observer per 510 META) Supplemento amministrativo ARRA 09/30/09-09/29/11
NCRR P20 RR11830 (PI Oliver, J., co-PI Eaton, P.) "Enhancing Multidisciplinary Research in New Mexico" 9/30/96 - 9/29/99
NCI P20 CA88807 (PI Willman, C.) "Sovvenzione per la pianificazione del Centro per il cancro dell'Università del New Mexico" 07/01/00-06/30/05
Finanziamento intramurale 1999-Presente: $ 437,266
Centro di scienze della salute dell'Università del New Mexico
Centro oncologico dell'Università del New Mexico
Facoltà di Medicina dell'Università del New Mexico Dipartimento di Patologia